細胞基質金屬蛋白酶（MMP-2）活性比色法定量檢測試劑盒產品說明書（中文版） 主要用途 細細胞基質金屬蛋白酶（MMP-2）活性比色法定量檢測試劑盒是一種旨在通過含硫多肽底物以及特定抑 制劑存在與否的情況下，受到 MMP2 的水解，釋放出巰基，進而使用 Ellman 試劑，產生黃色 5-巰基-2-硝 基苯甲酸產物吸光峰值的變化，即采用比色法來測定細胞裂解樣品中酶活性的而經典的技術方法。該 技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞裂解萃取液樣品（動物、人體）、部分或純化 酶樣品中基質金屬蛋白酶 2 的特異活性定量檢測，以及抑制劑和激活劑的篩選。產品嚴格無菌，即到即用， 操作簡捷，性能穩定，安全可靠。 技術背景 細胞基質金屬蛋白酶（MMP-2）活性比色法定量檢測試劑是一類結構高度同源的分泌型或膜相關性鋅內肽 酶的總稱，因含有金屬（鋅、鈣）離子而得名。其功能在于分解細胞外基質成分。迄今為止發現的MMPs 至少有28種，幾乎能降解除多糖以外的全部細胞外基質（extracellular matrix）成分，同時參與胚胎發育、 形態形成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、組織再吸收（tissue resorption）、疾病發生，例如關節炎、癌 細胞浸入轉移等。根據降解的底物不同可將MMPs分為4大類：（1）膠原酶：MMP1、MMP8、MMP13主要 消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖；（2）明膠酶（Ⅳ型膠原酶）：MMP2、MMP9，又稱明膠酶A、 B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維；（3）基質溶解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、 MMP12，主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、 MMP9；（4）膜型金屬蛋白酶：MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP，主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。 體內絕大多數細胞并不儲備MMPs，當需要MMPs的信號傳遞到細胞后才臨時合成，合成的MMPs以無活性 的酶原（proenzyme）形式分泌到細胞外，隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活，一種激活的 MMPs可激活另一種MMPs，形成瀑布效應。基質金屬蛋白酶-2，又稱明膠酶A （gelatinase-A）或IV型膠原 酶（type IV collagenase），其前體分子量為72kDa，激活后分子量為62和56 kDa。它在血清或細胞上清中濃 度通常為10至200納克/毫升。它的作用目標是天然和變性膠原蛋白（collagens）、纖維連接蛋白（fibronectin）、 彈性纖維蛋白（elastin）、層粘連蛋白-5 （laminin-5）、前體腫瘤壞死因子-α（pro-TNF-α）和神經（蛋 白）聚糖（neurocan）。基質金屬蛋白酶-2與腫瘤發展與轉移、血管形成、動脈粥樣硬化等疾病有關。基于 含硫多肽（thiopeptide）底物Ac-PLG（2-mercapto-4-methyl-pentanoyl）-LG-OC2H5，在特異性抑制劑OA-Hy 存在與否的條件下，受到MMP2的水解，釋放出巰基（sulfhydryl group），進而與Ellman試劑5,5-二硫基-雙 （2-硝基苯甲酸）[5,5’-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]反應后，產生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸 （5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），通過其吸收峰值的變化（412nm波長），來定量測定細胞基質金屬蛋 白酶2的特異活性。基質金屬蛋白酶2反應系統為： 產品內容 清理液（Reagent A） 毫升 裂解液（Reagent B） 毫升 緩沖液（Reagent C） 毫升 反應液（Reagent D） 毫升
