HUVEC 人臍靜脈內皮細胞
原代內皮細胞培養基,成分:88%原代內皮基礎培養基+10%FBS+1%P/S+1%原代內皮細胞培養添加劑 操作步驟: 復蘇步驟:①凍存管從液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中,迅速沒入37℃水浴鍋,搖晃凍存管加速溶解,以 1min內全部溶解為宜;②在超凈臺中將溶解好的細胞液加入到裝有9mL*培養基的離心管內,1000-1200rpm 離心5min,棄去上清液,用1-2mL*培養基重懸細胞。③將細胞懸液加入到含有5-6mL*培養基的T25瓶 中,放入培養箱培養。 細胞傳代:①將舊培養液吸除,PBS清洗兩遍后,加入1-2mL胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);②鏡下觀察 消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細胞層某處,肉眼可見細胞層脫落, 即消化完成,否則繼續消化),直接吸掉胰酶,加入5-6mL*培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹 散。③將細胞懸液按1:2比例分到新的T25瓶中,添加適當的*培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。; ④注意培養基pH值變化和細胞密度,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%-90%時,重復傳代操作或者 凍存。